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Die Tage der Insektenforscherinnen Evelyn und Cynthia laufen immer nach dem gleichen Muster ab: Die strenge Cynthia (Sidse Babett Knudsen) widmet sich ihrer wissenschaftlichen Arbeit, während Evelyn (Chiara D’Anna) zu entwürdigenden Tätigkeiten abkommandiert wird. Bald wird klar, dass es sich dabei um das alltägliche erotische Ritual eines Liebespaars handelt. Niemand stört sie in ihrer ländlichen Abgeschiedenheit, in der ihre einzigen sozialen Kontakte regelmäßige Vorträge über Schmetterlinge und Grillen sind. Doch im Laufe des Herbstes verändert sich das Machtverhältnis zwischen den Frauen. Ihre Rollenspiele nehmen die Züge eines subtilen Psychothrillers an. Duke of Burgundy ist eine Verbeugung vor dem Kino von Jess Franco und Luis Buñuel, von Strickland in malerische Naturaufnahmen eingebettet.